Front Immunol：使用格列汀降低大疱性类天疱疮和2型糖尿病患者的SDF-1/CXCL12水平，但不增加糖尿病患者抗BP180的自身抗体

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背景：大疱性类天疱疮(BP)是最常见的自身免疫性表皮下水疱性皮肤病，主要影响老年人。其特征是剧烈瘙痒和紧张的大疱。BP IgG自身抗体的主要靶点是BP180，一种基底角质形成细胞的跨膜半桥粒蛋白。大约85%的BP自身抗体靶向BP180的近膜细胞外第16非胶原(NC16A)结构域，抗NC16A IgG抗体水平与BP的严重程度相关。

流行病学数据令人信服地证明，BP最明显的风险因素是某些神经系统疾病和二肽基肽酶4 (DPP4)抑制剂(格列汀)的使用。格列汀是一种口服降糖药物，广泛用于治疗二型糖尿病(T2D) ，但使用格列汀增加BP风险的确切机制尚不清楚。此外，关于常规血压(r BP)和格列汀相关血压(BP+g)的临床和免疫学相似性和差异的数据很少，且部分相互矛盾。格列汀的靶标DPP4蛋白(也称为CD26)在各种细胞类型中普遍表达并具有多种功能。抑制DPP4/CD26活性的各种效应包括，例如，调节炎性细胞如T淋巴细胞。除了BP之外，DPP4及其抑制作用还与其他几种皮肤病有关，包括银屑病、特应性皮炎、T细胞淋巴瘤、肥大性瘢痕和硬化性疾病。

DPP4最具特征的底物之一是基质细胞衍生因子-1 (SDF‐1或CXCL12)，一种吸引趋化因子的淋巴细胞和单核细胞。选择性剪接产生几种SDF-1亚型，其中SDF-1a是最常见的。DPP4切割SDF-1的前两个氨基(N)末端氨基酸，并抑制其与CXC趋化因子受体4 (CXCR4)或非典型趋化因子受体3 (ACKR3，以前命名为CXCR7)的结合。CXCR4在大多数细胞中普遍表达，SDF‐1/ CXCR4轴参与胚胎神经和血管发育，并随后在组织中维持体内平衡，例如在白细胞运输和皮肤炎症期间。在皮肤中，SDF‐1的表达在伤口愈合期间在成纤维细胞和受伤的角质细胞中增加。此外，CXCR4及其配体SDF-1的皮肤表达在患有特应性皮炎、银屑病和角质化细胞来源的基底细胞癌和鳞状细胞癌的患者中上调。

我们和其他人之前发现，患高血压风险升高的患者，即患有神经系统疾病如阿尔茨海默病、多发性硬化症和帕金森病的患者，BP180自身抗体的患病率增加。

目的：在本研究中，我们调查了格列汀的使用如何影响T2D患者抗BP180 IgG自身抗体的血清阳性率。考虑到SDF‐1作为DPP4底物和淋巴细胞吸引剂的主要作用，以及其与炎症性皮肤病的关系，我们还分析了BP患者血清和皮肤样本中SDF-1的含量。

方法：这些患者分别接受过格列汀药物治疗(n = 136)和未接受药物治疗(n = 136)。西格列汀是最常开出的格列汀(125/136名患者)。使用ELISA检测。

结果：我们发现抗BP180免疫显性NC16A结构域的IgG自身抗体在5.9%接受格列汀治疗的T2D患者和6.6%接受非利普汀治疗的患者中出现。我们发现28%接受格列汀治疗的患者在ELISA中有识别天然全长BP180的IgG自身抗体，但在未接受格列汀治疗的患者中，血清阳性率甚至更高，为32%。对额外血清样本(n = 57)的进一步ELISA分析发现，在大约9年的随访期内，抗BP180的血清阳性率没有重大变化。在免疫印迹中，全长BP180被71%接受格列汀治疗的T2D患者和89%未接受格列汀治疗的患者识别，但只有46%的年龄和性别匹配的对照组识别。趋化因子基质衍生因子-1(SDF-1/ CXCL12)是DPP4的主要底物之一。免疫染色显示，SDF-1在BP患者皮肤中的表达显著增加，但不受先前格列汀治疗的影响。我们发现使用格列汀降低了BP和T2D患者的血清SDF-1a水平。

图1使用(+g)或不使用格列汀的T2D患者血清样本中抗BP180 NC16A结构域和全长BP 180的IgG自身抗体。使用可商购的BP180-NC16A ELISA和全长(FL) BP180 ELISA(内部),分别具有9.0和1.950 U/ml的截止值(虚线)。基线时，T2D和T2D+g组的人数均为136人(A，C)。总共分析了57份随访血清样本(B和D)。(A)在基线时，T2D和T2D+g组之间的血清抗BP180-NC16A IgG抗体水平没有显著差异。(B)当在基线和随访之间比较相同的个体病例时，观察到相似量的抗BP180-NC16A IgG抗体和阳性病例数。(C)在基线时，T2D组和T2D+g组的血清抗FL-BP180 IgG抗体水平相似。(D)在T2D+g组中，抗FL-BP180 IgG抗体水平在基线和随访之间观察到显著变化:阳性病例数从9例减少到2例(1例在基线和随访中均为阳性)。胡须表示第5和第95个百分点。显示了具有相关双侧P值的组之间的统计学显著差异。⇨，切换到；+g，格列汀类；Ab，抗体；BP，大疱性类天疱疮；Ctrl，控制；ns；不重要；二型糖尿病T2D；U/ml，单位每毫升。

表2在免疫印迹中，全长BP180被大多数T2D患者血清微弱识别，在T2D+g组中识别频率较低。

图2在免疫印迹中使用(+g)或不使用格列汀和对照的T2D患者IgG自身抗体对BP180表位的检测。(A)全长BP180多肽和谷胱甘肽-S-转移酶-BP180融合蛋白的示意图。(B)BP诊断前后健康对照、T2D患者、T2D+g患者和T2D+g患者的特异性BP180抗体和血清识别重组FL-BP180的实例。箭头表示BP180频段。(C)用18个T2D、17个T2D+g和14个对照血清样品对融合蛋白进行免疫印迹。还显示了大小分离的融合蛋白的代表性考马斯亮蓝染色凝胶。(D)显示了所示融合蛋白的光密度分类免疫印迹信号强度的相对频率和具有相应双尾P值的组之间的统计学显著差异。Ctrl，控制；ECD，胞外结构域；FP，融合蛋白；ICD，细胞内结构域；跨膜结构域。

图3使用(+g)或不使用格列汀的BP和T2D患者血清样本中SDF-1a的浓度。使用人CXCL12/SDF-1a ELISA测定血清SDF-1a水平。(A)使用格列汀与BP患者SDF-1a水平降低相关(BP+g组n = 20，BP组n = 20，健康年龄匹配对照组n = 20[BP对照组，79.4±2.1岁])。(B)使用格列汀与T2D患者SDF-1a水平降低相关(T2D+g组22例，T2D组21例，健康年龄匹配对照组18例[T2D对照组62.7±13.1岁])。方框描绘了第25和第75个百分位数(四分位数范围)，方框中的线是中位数。胡须表示1.5倍的四分位间距。显示了具有相应双尾P值的组之间的统计学显著差异。+g，格列汀；BP，大疱性类天疱疮；pg/ ml，微微克每毫升；二型糖尿病T2D；Ctrl，控制。

图4健康对照皮肤和病变BP皮肤中SDF-1的免疫染色。(A)SDF-1的免疫组织化学染色在健康对照皮肤中呈阴性。(B)在水疱附近和水疱液中检测到大量SDF-1阳性细胞(星号),伴随着水疱顶部和水疱边缘表皮的强烈染色。(C)在无水疱的BP病灶周围皮肤切片中，表皮上层染色强烈，真皮中阳性细胞相对较少。比例尺= 50米

结论：我们的结果表明，BP180的自身抗体在T2D患者中很常见，但血清阳性率不受使用西格列汀的影响。

原文出处： Nätynki A,  Leisti P,  Tuusa J, et al.Use of gliptins reduces levels of SDF-1/CXCL12 in bullous pemphigoid and type 2 diabetes, but does not increase autoantibodies against BP180 in diabetic patients.Front Immunol 2022;13