【衡道丨干货】病理技术——甲状腺组织冷冻切片技巧分享

甲状腺疾病是内分泌领域中最常见的疾病之一，其病程隐匿，不易在早期发现，但会对多个系统和器官产生影响，对人体健康构成威胁。据统计，在中国成人中通过超声检查发现直径0.5cm以上甲状腺结节的患病率达到20.43％，其中5%-15%为甲状腺癌。此外，甲状腺癌已经成为年轻女性中发病率最高的肿瘤之一，并有逐年增加的趋势。

虽然甲状腺癌因进展较慢，被戏称为“懒癌”，但其通常十分隐匿，不伴有任何症状，并且容易在早期就发生区域淋巴转移。大部分甲状腺癌的患者在确诊时已存在颈淋巴结转移。

目前，手术切除是甲状腺肿瘤的主要治疗手段，不同病理类型的甲状腺肿瘤——良性的甲状腺腺瘤、交界性甲状腺肿瘤与甲状腺癌，其生物学行为也有较大区别，对患者的治疗、预后都会产生极为重要的影响。

同样，甲状腺癌的淋巴结转移情况也对患者治疗策略具有重要意义。甲状腺组织术中冰冻病理检查诊断，因其能及时指导甲状腺手术方式及确定手术范围，受到了广大临床医师的青睐。精准的术中病理诊断结果，则需要高质量的冰冻切片作为保证。

本文就由深圳市人民医院姜阳阳老师结合日常工作，分享一些甲状腺组织冰冻切片的技巧，供大家参考。

 一、冷冻时间和切片温度

一般情况下，甲状腺取材是采用间隔平行切开的方法寻找病变部位。因组织本身具有一定硬度，取材通常较为平整规则，肿物暴露较为充分，容易识别。

当肿物较小或肉眼可见完整包膜时，包埋过程需要格外注意，要记住肿物的位置，以免在粗修过程中将肿物完全切除。此外，包膜周围一定要添加OCT，以便获得完整包膜，评估是否有包膜累犯。

甲状腺组织的取材方式—间隔平行切开

常见甲状腺肿物切面图

 二、冷冻的温度和时间

甲状腺组织含有丰富的结缔组织和腺泡，腺泡内充满胶质，在冷冻后组织易发脆，若温度太低或者冷冻时间太久，会进一步加剧组织脆化。

通常，大部分组织冷冻温度为-20℃左右，而甲状腺组织冷冻温度宜在-15℃左右。由于胶质内含有大量水分，冷冻过程应迅速，宜在2-3min内迅速冷冻变硬。然而，冰冻切片机的性能和机内的结霜情况等因素会影响甲状腺组织的冷冻时间，合理使用冷冻锤或速冻仪则有助于提高冷冻效率。

甲状腺标本完全冷冻变硬，组织表面无反光，甲状腺胶质变白，见少许红色间隔。

冷冻前

冷冻后

冷冻前

冷冻后

甲状腺肿物与正常组织冷冻后颜色不同，肿物区域呈片状白色，其余地方偏红。

三、粗修和切片

甲状腺癌常伴有局灶钙化、砂砾体或纤维化，这些特征对刀口伤害较大，为减少损伤，建议用废刀口进行粗修，粗修每次前进的厚度不超过40μm/圈，前进厚度过大，可能会对组织造成破坏。

切片厚度通常为5-7μm，过薄会增加切片难度，且染色较浅，太厚则易碎裂，并且会增加细胞密度，进而影响诊断的准确性。

部分技术人员在切甲状腺组织的时候，喜欢用手温加热组织，或将冷冻好的组织拿至切片机外稍回暖再进行切片，虽然这些方法能改变切片裂隙的现象，但是会增加冰晶的形成，导致空核出现，进而误导诊断。

此处推荐一个我常用的回温方法，当感觉组织可能冷冻过度时，应立刻关闭冷冻切片机样品头的制冷功能，1min后再切片，虽然会延长制片的时间，但是此法干净卫生，回温温和，对组织无影响。

甲状腺5μm和7μm厚度冷冻切片对比，差别不大，对诊断几乎无影响。

回温前后切片裂隙对比图

四、固定液的选择

甲醇和95%乙醇是病理科常用的固定液，无需配置，操作方便。由于甲状腺组织的结构特殊，用甲醇或95%乙醇固定后可能存在胶质脱落的现象。在固定液中加入一滴冰醋酸，可有效防止胶质脱落。但冰醋酸防止胶质脱落的原理尚不清楚。

部分技术人员会采用将切片在空气中晾干几秒再固定的方法，同样可以防止胶质脱落，但此种方法易导致细胞核肿胀，染色效果不佳。用防脱玻片贴片也可以保存胶质，只是较为浪费。

甲状腺胶质保留或丢失通常不会对甲状腺癌的诊断造成影响，但在畸胎瘤中，保留胶质对诊断地帮助较大。

胶质完全丢失

胶质部分丢失

胶质保存较好

五、染色与封片

冰冻染色一般所需时间较短，大部分实验室都配备了自动染色机，染色较为稳定。但如果采用手工染色，则需要注意固定后流水冲洗时间和伊红染色时间。

甲状腺胶质一般不会溶解在固定液中，但甲醇类固定液会促进胶质在水中脱落，如果冲洗不彻底，会粘附在组织上，影响染色效果。固定液若选择用含有冰醋酸的混合固定液，则需要注意伊红染色时间，冰醋酸会改变蛋白质等电点，促进伊红着色。

水洗不充分，胶质粘附在组织和玻片上

六、其他常见问题

贴片时牵拉过度

染色不均匀

核内冰晶

贴片组织重叠

固定不及时导致染色不佳

图左：染液不足导致染色不佳