Clin Chem：多中心评价循环血浆microRNA提取技术用于开发临床可行的逆转录定量PCR和下一代测序分析工作流程
2019-10-19 gladiator MedSci原创
在人体体液中，microRNA (miRNA)可以作为循环游离miRNA (cfmiRNA)，也可以分泌到细胞外小泡(EVmiRNA)中。目前。正在评估将miRNAs做为评估癌症患者的微创液体活检生物标志物。尽管开发循环miRNA临床分析方法日益增长，但需要仔细考虑分析前和分析参数的混淆效应。
在人体体液中，microRNA
(miRNA)可以作为循环游离miRNA
(cfmiRNA)，也可以分泌到细胞外小泡(EVmiRNA)中。目前。正在评估将miRNAs做为评估癌症患者的微创液体活检生物标志物。尽管开发循环miRNA临床分析方法日益增长，但需要仔细考虑分析前和分析参数的混淆效应。
通过反转录实时荧光定量PCR和下一代测序(NGS)，我们比较了5种不同的cfmiRNA提取方案和2种多中心EVmiRNA分离方案的提取效率。通过测量20名健康个体血浆中外源性添加celi-mir-39和6个靶向miRNA来评估不同提取方法的效率。
研究显示，两种检测方法有显著性差异。尽管柱状提取方法对内源性miRNA的分离是非常有效的，但是苯酚提取结合柱状miRNA纯化和超离心作用导致了分离miRNA的质量和数量下降。在所有的提取方法中，与其他靶向miRNA相比，广泛表达的miR-16具有较高的丰度。此外，使用miR-16作为量化周期值正常化的内源性对照，导致基于柱状的cfmiRNA提取方法的变异性降低。归一化NGS计数的聚类分析清楚地表明了方法依赖性的误差。
研究表明，血浆中的miRNA提取方法的选择会影响潜在的miRNA标志物候选和结果的解释机制，因此，在不同研究中应谨慎使用。
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